domingo, 18 de mayo de 2014

Prueba de PCR

Como sabemos muchas pueden ser las causas de una obstrucción de cualquiera de las arterias coronarias, provocando así una isquemia cardíaca.


La enfermedad coronaria puede estar relacionada con muchos factores, como el estilo de vida, hipertensión arterial, etc, pero puede haber un componente genético de importancia.

En un estudio realizado en el 2011 se pueden relacionar varios genes asociados a la enfermedad coronaria, pero el que adquirió una especial importancia en el estudio de esta, es el Gen de la enzima convertidor de angiotensina (ECA) y su polimorfismo de inserción/deleción (I/D),  ya que tiene un papel importante en la regulación de la presión arterial y la remodelación cardiaca, la cual se cumple por su producto la  Angiotensina II.

El estudio señala que el alelo D se acompaña de concentraciones plasmáticas y tisulares más elevadas de actividad de la ECA que el alelo I (inserción), por lo tanto la actividad en plasma de la ECA es elevada en sujetos homocigotos para la deleción (DD) comparado con los heterocigotos (ID) o sujetos homocigotos para la inserción (II). Entonces, el genotipo DD parece incrementar significativamente el riesgo de sufrir enfermedades cardiovasculares debido a su relación con una mayor producción de AII. 

Se realizo una prueba de PCR para determinar el polimorfismo de este gen, la cual consistió de la siguiente manera:

A 200 ng de ADN genómico se le agregó 0.5 mM de (dNTP‘s), 2,5 mM de MgCl2, Buffer de PCR 10X, 10 pmol de los siguientes oligonucleótidos: (ACE1) CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT, (ACE2) GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT y 2,0U de Taq DNA polimerasa (DNA polymerase Invitrogen®) para un volumen final de 25 μl. La amplificación del ADN se hizo en un termociclador MJ Research PTC-100.
Ciclos
  • Desnaturalización: a 94º C por 1 min.
  • Alineamiento: 63ºC por 1 min.
  • Extensión: 72ºC por 10 min.
El estudio realizado confirma que la enfermedad coronaria es mas predominante en el genero masculino que en el femenino, pero en relación a la actividad de la enzima demuestra que depende del genotipo de cada paciente.


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